建立无菌室浮游菌测试标准操作程序，规范无菌室浮游菌的检测。

 

2、范围

 

适用于无菌室（包括洁净工作台）浮游菌的测试和环境验证。

 

3、职责

 

QA、QC人员遵照执行。

 

 

 

4、内容

 

4.1 参考标准：GB/T 16293-2010

 

4.2 测试方法

 

 本测试方法为计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基（选择能证实其能够支持微生物生长的培养基），经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该无菌室的微生物浓度。

 

4.3 测试仪器、辅助设备和培养基

 

浮游菌采样器、培养皿（选用与仪器相适应的培养皿）、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。

 

4.4  测试状态及测试时间

 

4.4.1 静态和动态两种状态均可进行测试，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

 

4.4.2 在静态a测试时，单向流无菌室（区），测试在净化空调系统正常运行时间不少于10分钟后开始；非单向流无菌室（区），测试在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。在静态b测试时，单向流无菌室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过10分钟自净后开始；非单向流无菌室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过20分钟自净后开始。

 

 

 

4.5  采样点的确定

 

4.5.1  最少采样点数目见表1，每次最小采样量见表2。

4.5.2   采样点位置布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，采样点按照《洁净区环境监控管理规程》附件×××车间洁净度监测采样点布局图的要求布置，每个采样点一般采样一次。

 

4.5.3工作区采样点位置离地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送风口测点位置离开送风面30cm左右，可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

 

 

 

4.6     测试准备

 

4.6.1   采样器在进入被测区域前先清洁表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被测区域内，与被测试区域一起消毒（用于A级无菌室的采样器必须预先放在被测房间内）。

 

4.6.2  A/B级区采用一次性培养皿，其它区域按无菌操作要求，在中检室洁净工作台上提前制备培养备用（将灭菌后的培养基用水浴溶解，冷却至约50-60℃，Φ90mm培养皿每个倾注约20ml培养基，Φ150mm培每个倾注约30ml培养基），培养皿加盖后在室温下放至凝固。自制好的培养皿在无菌室内存放不超过48小时，2~8℃保存的培养皿一般不超过1周，一次性培养皿在标注的有效期内使用，过期不得使用。

 

4.6.3  A/B级区使用的培养皿在区域消毒前一次性传入，随环境一起消毒，在消毒液取用间架子上暂存，在有效期内使用。若需临时传入，则必须在前一天臭氧消毒前通过C级与B级传递窗传入B级区进行臭氧消毒，第二天使用。传入前表面也必须用75%酒精擦拭。其它区域用培养皿按物品传入要求当天传入使用。

 

4.6.4  采样前，先用75%酒精清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面（FKC型浮游空气尘菌采样器用酒精清洗采样头）。

 

4.6.5  测试具体操作见“JYQ-Ⅱ型浮游菌采样器标准操作程序或FKC-1型浮游空气尘菌采样器标准操作程序”。

 

4.6.6  采样结束后，盖上培养皿盖子，在培养皿上标注所有信息（包括产品批号，放置位置等），将培养皿用适宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒温培养箱中培养，培养时间不少于2天。

 

4.6.7  培养结束后逐个检查培养皿，用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

 

 

 

4.7   测试记录应包含以下内容

 

4.7.1   被测试区域名称、测试日期、测试依据、测试者姓名、测试仪器及测试方法的描述，测试时所采用的状态和室内测试人员数，采样点数目，测试次数、采样流量，测试结果（包括所有统计计算资料）等。

 

4.7.2  若为动态测试，还应记录现场操作人员数量，现场设备运转情况等。

 

4.8   结果计算

 

4.8.1  用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

 

4.8.2  每个测点的浮游菌平均浓度计算按下式进行

 

 

 

4.9   结果评定

 

4.9.1  每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

 

4.9.2  在静态测试时，若某测点的浮游菌平均菌浓度超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。

 

4.9.3  若有超过规定者，必须及时与生产部门联系，对该区域进行消毒或其它处理，然后重新测试至合格。

 

 

 

4.10    日常监控

 

4.10.1  浮游菌日常监控设纠偏限度和警戒限度（限度范围及取样频次见《洁净区环境监控管理规程》），以保证无菌室（区）的微生物浓度受到控制，定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并作倾向分析。静态和动态的监控都可以采用该方法。

 

4.10.2  对于浮游菌的取样频次，如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次

 

——连续超过纠偏限度和警戒限度；

 

——停工时间比预计延长；

 

——关键区域内发现有污染存在；

 

——在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修；

 

——日常操作记录反映出倾向性的数据；

 

——消毒规程的改变；

 

——引起生物污染的事故等；

 

——当生产设备有重大维修或增加设备时；

 

——当无菌室（区）结构或区域分布有重大变动时。